科普:各类新冠病原与抗体的原理及检测方法,您知道吗?
3月15日,国家卫健委发布了《新型冠状病毒肺炎方案(试行第九版)》,其中提到“在核酸检测发现病例的基础上,增加抗原检测的方法”。检测对于应对新冠疫情至关重要。目前,检测新冠病毒感染的方法有三种,包括核酸检测、抗原检测和抗体检测。今天,小编向您科普一下新冠病毒病原与抗体的检测原理及操作方法。
新冠抗原检测
抗原快速检测可用于2周内出现症状的诊断为急性感染的病人。其操作简单、出结果快、成本低。尽管检测下限为每毫升105-106基因组拷贝,但病毒载量低于每毫升106基因组拷贝的个体不可能传播病毒,因此可快速识别最有可能传播病毒的感染者。几乎所有的抗原测试都使用新冠病毒核衣壳蛋白作为靶标,因此受变异株影响的可能性较小。检测方式为胶体金免疫层析、乳胶法、荧光免疫层析三种类型。
胶体金免疫层析
原理:胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下,聚合成一定大小的金颗粒,在静电的作用下成为稳定的胶体状态,形成带负电的疏水胶溶液。胶体金在弱碱环境下带负电荷,可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合。
检测流程:
1、取样。打开试剂盒包装,取出拭子取样。
2、稀释样本。将拭子放入稀释液当中,挤压拭子头数次,充分溶解样本。
3、检测。取出测试卡,平放在桌面,滴3滴样本到加样孔。
4、观察。计时15分钟后观察结果。
阴性样本
阳性样本-右侧
乳胶法
原理:乳胶法和胶体金法的标记物不同,乳胶法是以乳胶颗粒作为载体的间接凝集试验。吸附可溶性抗原在其表面,特异性抗体与之结合后,可产生凝集反应。
检测流程与胶体金免疫层析法类似。此方法特点在于不需使用特殊仪器,肉眼即可判断,并且操作简便、检测时间短。
荧光免疫层析
原理:检测靶标为病毒蛋白(如核衣壳或刺突蛋白),通常采集鼻咽拭子。
检测方法:需要手持式荧光免疫分析仪。检测人员使用咽拭子取样,之后将咽拭子插入提取管,旋转10次,挤压并抽出拭子,使液体尽可能留在管内,盖上滴头。依次向各检测卡加样孔滴加3滴提取物,静置15分钟,将检测卡插入仪器检测口,填写样本信息或扫描信息,点击快速测试按钮,设备自动判读结果。直接针对病毒中特有蛋白质(即抗原)检测,能快速在急性感染期检测出人体是否含有病毒,可在早期对疑似人群进行分流和管理。
检测方法
1、吸取血样。需要采集指尖血。
2、加样。使用吸管吸取血液在检测卡加样孔中滴入血样与稀释液。
3、水平放置10分钟。
4、观察。在检测卡观察孔中查看有无红色条带出现。
磁微粒化学发光
磁微粒化学发光法为高度敏感的免疫检测,凡具有抗原性的物质均可用此方法测定。其在化学发光检测基础上,采用磁性纳米粒子,使检测具有高灵敏度和速度快的优点。不过,磁微粒化学发光法选择性差,会对一系列的化合物做出反应,而非特定化合物。因此,准确性不好。而且,环境对检测影响较大,容易导致误差。
原理:将新冠病毒抗原蛋白包被在微粒上,抗原蛋白结合新冠肺炎患者血清中的IgG/IgM,化学标记的人IgG/IgM二抗,经过清洗去除游离态的化学标记物。发光底物产生化学发光,通过测量光信号完成对血清中IgG/IgM的定性或定量检测。将试剂0、试剂1、和样本加入到反应管中,若样本中新冠病毒IgM抗体,则与以上试剂中的重组抗原形成复合物,同时结合到磁性颗粒上,洗掉游离成分。将试剂2加入反应管中,碱性磷酸酶标记的抗体作为二抗,与样本中IgM抗体结合,并形成碱性磷酸酶标记抗体-IgM抗体-重组抗原-磁性颗粒复合物,洗掉游离成分。加入全自动免疫检验系统底物液,碱性磷酸酶催化底物液发光,测定各样本管的发光值。样本发光值与新冠病毒IgM抗体浓度呈正相关,从而检测人血清中的新冠病毒抗体IgM抗体。
检测流程:
1、样本处理。取1ml样本稀释液,加入20ul样本,混匀5S,静置15min。
2、设置阴性、阳性 各2管及处理后样本,分别加入50ul新冠病毒IgM抗体试剂1、75ul处理后样本、50ul新冠病毒IgM抗体试剂0、75ul新冠病毒IgM抗体试剂。2两步法,反应时间35min。二次清洗后每管加入全自动免疫检验系统底物液200ul,避光检测,反应5S读数。
随着国务院《关于新冠病毒抗原检测应用方案(试行)的通知》的印发,获得新冠抗原检测注册证的企业不断增多,其IVD市场也迸发出勃勃生机。虽然国务院指出可通过省级集中招采,降低检测试剂价格,但是国内新冠抗原检测市场仍然呈现繁荣态势。因抗原试剂的需求量巨大,多家试剂厂商宣布积极生产以确保供应产能。需求增加也将不断促进产业链上游企业的发展。
康泰医学-新冠自检测试盒生产厂家 (可出口)
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