CD20：狂奔中的“战马”，新型药研发从未停歇！

　　2022年8月23日，国家药品监督管理局（NMPA）正式批准神州细胞公司，新型抗CD20单抗瑞帕妥单抗（Ripertamab）上市，也是国产首款自主研发的全新型抗CD20单抗，用于非霍奇金淋巴瘤（NHL）的治疗。瑞帕妥单抗是一款结构优化、安全升级的新型抗CD20单抗，选用中国人血细胞提取的最常见天然IgG1同种异型G1m（1,17）。与进口利妥昔单抗相比，国产瑞帕妥单抗在CH1区第219位的氨基酸是缬氨酸，而利妥昔单抗则为丙氨酸。使得瑞帕妥单抗在不损失药物有效性的前提下，却拥有更好的临床安全性，可显著降低不良反应的发生率 [1]。陆续研究证实抗CD20疗法还与COVID-19病程有关，新冠病毒依然在全球肆虐，极其可能为CD20单抗药及研究带来长期的增长。作为全球第一款治疗肿瘤的单抗，国内外CD20市场竞争激烈，尤其是抗CD20单抗，其临床项目达到100多款。目前，CD20已上市或III期临床的产品接近50余款，包括新型CD20单抗药、生物类似药物、双特异性抗体、小分子化药等创新药。CD20犹如狂奔中的“战马”，新型药研发从未停歇！

　　1. 什么是CD20?

　　2. CD20相关的调节机制

　　2.1 CD20与B细胞抗原受体

　　2.2 CD20与钙离子信号传导

　　2.3 抗CD20单抗与B细胞淋巴瘤

　　3. 靶向CD20的治疗方式有哪些？

　　4. CD20生物药汇总

　　CD20是位于B细胞上的一种非糖基化磷蛋白，主要在前B细胞到成熟B细胞阶段表达。CD20分子属疏水、4次跨膜蛋白，由297个氨基酸残基组成，相对分子质量（Mr）约为33×103。CD20的表达在不同的B细胞恶性肿瘤之间是高度可变的 [2-3]。CD20的分子功能与B细胞受体（BCR）的信号传导倾向有关。CD20被证明与B细胞上的其他多种表面蛋白（如CD40、CD53、CD81和CD82）相互作用。有研究表明，一些表观遗传因子（EZH2、HDAC1/2、HDAC6、Sin3A-HDAC1复合物）和转录因子（USF、OCT1/2、PU.1、PiP、ELK1、ETS1、SP1、NFκB、FOXO1、SMAD2/3）也可调节CD20的表达 [4-6]。大量研究已证实CD20是人类B淋巴细胞表面特异性分子标记物，对B淋巴细胞的增殖和分化具有调节作用。绝大部分的B淋巴细胞瘤都有CD20的表达，CD20分子易与抗体结合，且结合后不易脱落、不内化，成为治疗B细胞淋巴瘤的理想靶抗原。目前，抗CD20单克隆抗体是治疗B细胞淋巴瘤（B-cell non-Hodgkin’s lymphoma）的重要靶向药（图1） [4]！

　　图1. 抗CD20单克隆抗体是治疗BCL的重要靶向药 [4]

　　CD20在B淋巴细胞表面以寡聚体形式存在，现有实验证明CD20在B细胞表面形成的是四聚体。CD20与B细胞抗原受体（B cell antigen receptor，BCR）的膜型IgM（sIgM）存在相互作用已被被证实，B细胞活化后，BCR-CD20复合物会解离，磷蛋白、钙调素结合蛋白会暂时被招募到CD20，从而参与胞内信号的传导 [2-4]。

　　钙离子流动对细胞的生物学功能有重要影响。钙池可调控钙离子进人（store-operated calcium entry，SOCE），主要是通过钙离子释放激活钙离子（calcium-release-activatedcalcium，CRAC）通道来提高细胞内的钙离子浓度，是淋巴细胞提高胞内钙离子浓度的主要方式。越来越多的证据表明CD20参与了SOCE，CD20对于胞内钙离子浓度有重要的调节作用，而SOCE所引起钙离子流的强度和持续时间，将影响受体与抗原结合后细胞的功能 [6-8]。

　　抗CD20单克隆抗体可以杀死B细胞来源的肿瘤，大量证据表明，抗CD20单克隆抗体与三种作用机制有关，即抗体依赖性细胞毒性（ADCC）、补体依赖性细胞毒性（CDC）和抗体与CD20分子结合引起的直接效应，包括抑制细胞生长、改变细胞周期和细胞凋亡。ADCC是指涂有抗CD20的B细胞通过一种基于细胞的机制被杀死。CDC是指补体膜攻击复合物在细胞表面组装起来。除在正常B细胞中表达外，CD20还在B细胞来源的淋巴瘤、白血病等的肿瘤细胞表达，以及涉及免疫疾病和炎症疾病的B细胞中表达，所以，CD20抗原成为淋巴癌、白血病和某些自体免疫等疾病治疗的目标靶点 （图2）[3, 9-12]。

　　图2. 抗CD20单抗抗肿瘤调节作用 [3]

　　靶向CD20的治疗的药物，主要有三种形式，抗CD20单克隆抗体、CAR-T和双特异性抗体。众多已上市和在研的生物制剂集中在CD20单克隆抗体。根据人源化程度以及Fc片段修饰，抗CD20单抗可分为三代，其中第一代是以利妥昔单抗为代表的嵌合或者鼠源单抗，第二代是以奥法木单抗为代表的人源化单抗，第三代的抗CD20单抗以奥妥珠单抗为代表，其抗体的Fc片段经过了糖基化修饰 [13-15]。

　　第一代抗CD20治疗性单克隆抗体药利妥昔单抗，临床多用于联合治疗，特别是难治愈和复发性的淋巴瘤，常用的联合用药方式是R-CHOP，即利妥昔单抗、环磷酰胺、阿霉素、长春新碱、和泼尼松联合使用；第二代抗CD20单抗包括Ofatumumab、Veltuzumab和Ocrelizumab等，降低了第一代抗体的免疫原性，如Ofatumumab能有效诱导利妥昔单抗抵抗的细胞和CD20低表达的恶性B细胞的补体依赖性细胞毒性；第三代单抗奥滨尤妥珠Obinutuzumab，通过糖基化修饰抗体Fc片段，增强靶点结合力，使得ADCC效应增强 [13-15]。

　　来自Synapse数据统计显示，全球共有184种针对CD20的生物制剂处于临床开发阶段（表1）。全球已上市约26款抗CD20单抗。国内有3款抗CD20单抗获批，来自复宏汉霖的汉利康、信达生物的达伯华，以及最近获批的神州细胞的瑞帕妥单抗（SCT400）。此外，正大天晴、华兰生物、优科生物、恒瑞医药、诺诚健华、海正药业、深圳信立泰、上海生物制品研究所、AbbVie、Roche、Vaccinex、Immunomedics等国内外企业都在布局抗CD20单抗药物。抗CD20抗体三代的较量正处于火热阶段，更多创新药也蓄势待发，如CD20的双抗、ADC、CAR-T等等！

　　表1. 数据来源：Synapse部分LC-MS/MS Analysis

　　Based on the SEQUEST from database of Mammalian Cell host and target protein, the LC-MS/MS Analysis result of CSB-MP015007HU could indicate that this peptide derived from Mammalian Cell-expressed Homo sapiens (Human) CD20.

　　Based on the SEQUEST from database of Mammalian Cell host and target protein, the LC-MS/MS Analysis result of CSB-MP015007HU could indicate that this peptide derived from Mammalian Cell-expressed Homo sapiens (Human) CD20.

　　参考文献：

　　[1] Shi, Yuankai, et al. "Comparison of efficacy and safety of ripertamab (SCT400) versus rituximab (Mabthera) in combination with CHOP in patients with previously untreated CD20positive diffuse large Bcell lymphoma: A randomized, singleblind, phase III clinical trial." Hematological Oncology (2022).

　　[2] Wu, Xin, et al. "The Efficacy and Safety of Anti-CD20 Antibody Treatments in Relapsing Multiple Sclerosis: A Systematic Review and Network Meta-analysis." CNS drugs (2022): 1-16.

　　[3] Schilhabel, Anke, et al. "CD20 Expression as a Possible Novel Prognostic Marker in CLL: Application of EuroFlow Standardization Technique and Normalization Procedures in Flow Cytometric Expression Analysis." Cancers 14.19 (2022): 4917.

　　[4] Pavlasova, Gabriela, and Marek Mraz. "The regulation and function of CD20: an “enigma” of B-cell biology and targeted therapy." Haematologica 105.6 (2020): 1494.

　　[5] Shree, Tanaya, et al. "CD20-targeted therapy ablates de novo antibody response to vaccination but spares preestablished immunity." Blood cancer discovery 3.2 (2022): 95-102.

　　[6] Cree, Bruce AC. "All anti-CD20 monoclonal antibodies have similar efficacy and safety risks: Yes." Multiple Sclerosis Journal 28.12 (2022): 1843-1844.

　　[7] Schuster, Stephen J., et al. "Characterization of CD20 expression loss as a mechanism of resistance to mosunetuzumab in patients with relapsed/refractory B-cell non-Hodgkin lymphomas." (2022): 7526-7526.

　　[8] Walshe, Claire A., et al. "Induction of cytosolic calcium flux by CD20 is dependent upon B Cell antigen receptor signaling." Journal of Biological Chemistry 283.25 (2008): 16971-16984.

　　[9] Liu, Jinny L., et al. "Selection and characterization of single domain antibodies against human CD20." Molecular Immunology 78 (2016): 146-154.

　　[10] Schneider, Dina, et al. "Trispecific CD19-CD20-CD22–targeting duoCAR-T cells eliminate antigen-heterogeneous B cell tumors in preclinical models." Science Translational Medicine 13.586 (2021): eabc6401.

　　[11] Grandjean, Capucine L., et al. "Imaging the mechanisms of anti-CD20 therapy in vivo uncovers spatiotemporal bottlenecks in antibody-dependent phagocytosis." Science Advances 7.8 (2021): eabd6167.

　　[12] Pozzo, Federico, et al. "SF3B1-mutated chronic lymphocytic leukemia shows evidence of NOTCH1 pathway activation including CD20 downregulation." haematologica 106.12 (2021): 3125.

　　[13] Goldenberg, David M., and Robert M. Sharkey. "Sacituzumab govitecan, a novel, third-generation, antibody-drug conjugate (ADC) for cancer therapy." Expert Opinion on Biological Therapy 20.8 (2020): 871-885.

　　[14] Asano, Teizo, et al. "Epitope mapping of an anti-CD20 monoclonal antibody (C20Mab-60) using the HisMAP method." Monoclonal antibodies in immunodiagnosis and immunotherapy 40.6 (2021): 243-249.

　　[15] Luo, Chengxin, et al. "Efficacy and safety of new anti-CD20 monoclonal antibodies versus rituximab for induction therapy of CD20+ B-cell non-Hodgkin lymphomas: A systematic review and meta-analysis." Scientific reports 11.1 (2021): 1-14.

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