艾美捷MTT细胞增殖检测试剂盒测定方案

　　细胞增殖的测量和监测是任何实验室中必不可少的技术专注于基于细胞的研究。该技能还允许优化细胞培养条件作为细胞因子，生长因子或激素活性的测定。更重要的是，细胞抑制毒理学测试中抗癌化合物的性质，治疗化学品在药物中的功效筛选和细胞介导的细胞毒性都可以通过定量和监测来评估细胞增殖。

　　细胞增殖特征包括细胞代谢活性和细胞膜完整性。一个测量代谢活性的方法是用四唑盐如WST-1孵育细胞，通过代谢活性细胞裂解成有色甲product产物。同样，绿色荧光染料Calcein-AM可以测量增殖活细胞中的细胞内酯酶活性是细胞活力的另一个指标。

　　艾美捷MTT细胞增殖检测试剂盒测定原理：

　　Cell Biolabs的CytoSelect? MTT细胞增殖测定提供了比色形式测量和监测细胞增殖。该试剂盒含有足够的试剂用于评估在96孔板中进行960次测定或在24孔板中进行192次测定。细胞可以被镀，然后用影响增殖的化合物或药剂。然后用增殖试剂检测细胞，在活细胞中由黄色四唑MTT转化为紫色福尔马赞形式细胞还原酶（图1）。细胞增殖的增加伴随着信号的增加，虽然细胞增殖（和信号）的减少可以表明化合物的毒性作用或次优的培养条件。该测定原理是基本的，可应用于大多数真核生物细胞系，包括贴壁和非贴壁细胞以及某些组织。这种细胞增殖试剂可用于检测细菌，酵母，真菌，原生动物以及培养的哺乳动物中的增殖

　　和鱼细胞。

　　

　　艾美捷MTT细胞增殖检测试剂盒相关研究：

　　1.CBA-080:CytoSelect? 24孔失巢凋亡测定

　　2.CBA-081:CytoSelect? 96孔失巢凋亡测定

　　3.CBA-230：细胞衰老测定试剂盒（SA-b-gal染色）

　　4.CBA-231:96孔细胞衰老测定（SAβ-Gal活性）

　　5.CBA-232：定量细胞衰老测定（SAβ-Gal）

　　6.CBA-240：细胞活力和细胞毒性测定

　　7.CBA-251细胞选择? BrdU细胞增殖ELISA试剂盒

　　8.CBA-253细胞选择? WST-1细胞增殖测定试剂

　　套件组件

　　1.MTT细胞增殖测定试剂（部件号125201）：一瓶10mL MTT试剂。

　　2.洗涤剂溶液（部件号125202）：一瓶100毫升洗涤剂溶液

　　艾美捷MTT细胞增殖检测试剂盒测定方案：

　　1.制备含有0.1-1.0 x 106的细胞悬液培养基中的细胞/ml。

　　2.将每孔100μL加入96孔细胞培养板或每孔500μL加入24孔细胞培养物中有或没有待测化合物的板。细胞在37°C和5%培养24-96小时加湿培养箱中的二氧化碳。

　　3.加入10μlCytoSelect? MTT细胞增殖测定试剂，如果使用96-孔板，或24孔板的每个孔50μL。

　　4.在37°C和5%CO2下孵育平板3-4小时，直至可见紫色沉淀（细胞在光学显微镜下可以更精确地观察到沉淀物）

　　5.在96孔板的每孔中加入100μL去污剂溶液，或在24孔板的每孔中加入500μL去污剂溶液盘子。

　　6.在室温下孵育2小时至避光过夜。

　　注意：在井中与洗涤剂溶液长时间孵育可能导致沉淀或浑浊可以增加背景。如果观察到沉淀，将板在37℃加热10-20分钟并搅拌溶解沉淀物。

　　7.使用540-570nm作为主波长读取吸光度。

　　相关文献：

　　1. Jacobsen MD, Weil M, Raff MC. (1996) J Cell Biol 133, 1041.

　　2. Papadopoulos NG, Dedoussis GV, Spanakos G, Gritzapis AD, Baxevanis CN, Papamichail M.

　　(1994) J Immunol Methods 177, 101.

　　3. Yamaori S, Ishii H, Chiba K, Yamamoto I, Watanabe K (2013) Toxicology 314, 251

　　4. Wang Y, Qu L, Gong L, Sun L, Gong R, Si J (2013) Cancer Biother Radiopharm. 28, 623

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