过氧化氢（H2O2）含量检测试剂盒（硫酸钛比色法）

　　过氧化氢（H2O2）含量检测试剂盒（硫酸钛比色法）

　　产品货号：BA1543

　　产品规格：50T

　　产品简介：

　　过氧化氢(H2O2)是生物体内最常见的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化产生，由CAT和POD等催化降解。H2O2不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。生命体内积累的H2O2是由一些氧化物催化超氧阴离子发生氧化还原反应而形成，H2O2相对超氧阴离子性质稳定，但其存在可以直接或间接导致细胞膜脂质过氧化损害，加速细胞的衰老和解体，H2O2也是许多氧化应激反应中的关键调节因子。

　　过氧化氢(H2O2)检测试剂盒(硫酸钛比色法)其检测原理是H2O2与硫酸钛反应生成的过氧化物-钛复合物黄色沉淀，溶解于强酸中，其黄色深浅与过氧化氢浓度在一定范围内呈线性关系，可通过比色法检测 412nm 处吸光度。该试剂盒主要用于检测植物组织、血清、血浆等样品中过氧化氢(H2O2)含量。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

　　产品组成：

　　

　　自备材料：

　　1. 蒸馏水、丙酮

　　2. 匀浆器或研钵

　　3. 低温离心机

　　4. 分光光度计、比色杯

　　操作步骤：（仅供参考）

　　1. 准备样品：

　　①植物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取5g，加入5ml预冷的丙酮，在冰浴条件下迅速匀浆或研磨，4℃ 12000g离心20min，收集上清液，测量提取液总体积，4℃保存备用。

　　②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，4℃保存，用于过氧化氢的检测。

　　③高活性样品：如果样品中含有较高浓度的过氧化氢，可以使用丙酮进行恰当的稀释。

　　2. 配制10mM H2O2标准溶液：由于过氧化氢不是非常稳定，使用前需自行测定过氧化氢

　　的实际浓度。本试剂盒提供的H2O2基液的H2O2浓度约为1M，用蒸馏水稀释100倍,使H2O2浓度约为10mM。蒸馏水调零，分光光度计测定A240，根据公式H2O2浓度(mM)=22.94×A240计算出H2O2基液中H2O2的实际浓度，再用丙酮稀释H2O2基液配制10mM H2O2-丙酮标准溶液。(一般情况下，新配制的10mM H2O2基液A240为 0.4~0.45，3个月以后A240为0.35~0.42)

　　按下表依次稀释(常用浓度0.3-3mM,即1~5号)：

　　

　　3. 配制硫酸钛溶液：0.3g硫酸钛加入6ml蒸馏水中，即为5%硫酸钛溶液，4℃保存。

　　4. H2O2加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的H2O2浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。

　　

　　5. H2O2测定：混匀，室温放置5min，12000g离心15min，弃上清液，留取沉淀，如有必要可加入预冷丙酮反复洗涤沉淀物。向各管的沉淀中加入2ml酸性基液，摇动，使沉淀完全溶解。比色杯光径1cm，空白管调零，分光光度计测定412nm处各标准管、测定管的吸光度，如果没有分光光度计，亦可用酶标仪检测。

　　计算：以系列丙酮-H2O2标准(0.3、0.5、0.8、1、3、5、8 mM)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，求得回归方程。以测定管吸光度代入回归方程求得待测样品中H2O2的浓度。

　　组织样品H2O2 (mmol/g)=(C0×VT×N)/m

　　液体样品H2O2 (mmol/L)=C0×N

　　式中：C0=根据待测样品的吸光度在标准曲线求得H2O2浓度(mM)

　　VT=待测样品的总体积(L)

　　m=样品质量(g)

　　N=样本稀释倍数

　　注意事项：

　　1. 本试剂盒亦可用酶标仪进行检测，但检测的样本数相应增加。

　　2. 加入碱性基液、硫酸钛溶液时，应直接加入至溶液中，不要粘到管壁。

　　3. 过氧化物-钛复合物黄色沉淀溶解于酸性基液时需要一段时间，需完全溶解，否则有可能影响测定结果。

　　4. H2O2基液和碱性基液应严格密闭保存，避免挥发，否则效率会下降。

　　5. H2O2基液和酸性基液有一定腐蚀性，请小心操作。

　　6. 硫酸钛溶解于水后应尽早使用，如暂时不用，可短期放置4℃冰箱保存。亦可用分析天平称取一定量的粉剂，配置5%的浓度即可。

　　7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

　　有效期：12个月有效。4℃运输。

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