小鼠糖类抗原125（CA125）定量检测试剂盒（ELISA）

　　使用说明书                               

　　【试剂盒名称】

　　小鼠糖类抗原125（CA125）定量检测试剂盒（ELISA）

　　【试剂盒用途】

　　定量检测小鼠血清、血浆及相关液体样本中小鼠糖类抗原125（CA125）的含量。

　　【检测原理】

　　本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被小鼠糖类抗原125（CA125）抗体的透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中小鼠糖类抗原125（CA125）浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中小鼠糖类抗原125（CA125）含量。

　　【试剂盒组成】

　　1

　　酶标包被板

　　12孔×8条

　　7

　　显色剂A液

　　6mL

　　2

　　标准品：80 U/ml

　　0.6mL

　　8

　　显色剂B液

　　6mL

　　3

　　20倍浓缩洗涤液

　　25mL

　　9

　　终止液

　　6mL

　　4

　　标准品稀释液

　　6mL

　　10

　　说明书

　　1份

　　5

　　样本稀释液

　　6mL

　　11

　　封板膜

　　2张

　　6

　　酶标试剂

　　6mL

　　12

　　密封袋

　　1个

　　备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：80、40、20、10、5、2.5 U/ml

　　【需要而未提供的试剂和器材】

　　1、37℃恒温箱

　　2、标准规格酶标仪

　　3、精密移液器及一次性吸头

　　4、蒸馏水

　　5、一次性试管

　　6、吸水纸

　　 

　　【操作步骤】

　　1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。

　　2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

　　3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。

　　4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

　　5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。

　　6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50μL，空白对照孔不加。

　　7、温育：重复4的操作。

　　8、洗板：重复5的操作。

　　9、显色：每孔先加入显色剂A 液50μL，再加入显色剂B液 50μL，37℃避光显色15min。

　　10、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。

　　11、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。

　　12、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

　　 

　　【样本要求】

　　1、样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

　　2、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

　　3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

　　 

　　【注意事项】

　　1、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。

　　2、酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。

　　3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

　　4、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

　　5、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头；酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔；不得重复使用封板膜。

　　6、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用。

　　7、底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

　　【操作程序总结】

　　 

　　准备试剂，样品和标准品

　　 

　　 

　　加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟

　　 

　　洗板4次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟

　　 

　　洗板4次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

　　 

　　加入终止液

　　 

　　15分钟之内读OD值

　　 

　　计算

　　 

　　【检测范围】

　　2.5-80 U/ml

　　【规格】

　　96人份/盒

　　【贮藏】

　　2-8℃，避光防潮保存。

　　【有效期】

　　6个月