PFGE科普

　　PFGE是脉冲场电泳的英文缩写，是一种用于分离大型DNA分子的技术，方法是向凝胶基质施加周期性改变方向的电场。PFGE是一种高度区分性的分子分型技术，也是国内外监测程序中的金标准，其通过比较任何两个分析株的指纹图谱，来研究他们是否来自同一来源的菌株。

　　PFGE在分子流行病学、物理图谱构建、基因组结构分析等方面有广泛的应用。具体来说，PFGE可以：

　　用于对已确认的暴发疫情进行传染源的追踪，从而有效预防疫情的再次发生；

　　用于构建细菌物种染色体的物理图谱，提供有关基因组中遗传物质的空间分布和排列的信息；

　　用于分析基因组中的重复序列、插入序列、转座子等结构变异，揭示基因组的进化和功能；

　　PFGE实验的主要步骤如下：

　　1. 细菌培养    选择合适的培养基和条件，培养目标细菌 ；  

　　2. 制备小胶块    将细菌悬液与熔融的琼脂糖混合，倒入模具中，制成含有细胞的小胶块；    

　　3. 胶块裂解    将小胶块在含有裂解缓冲液和蛋白酶K的水浴中孵育，使细胞原位裂解，释放DNA ； 

　　4. 胶块清洗    将小胶块在含有TE缓冲液和EDTA的水浴中多次清洗，去除杂质和残留的裂解液 ；

　　5. 酶切    将小胶块在含有限制性内切酶的反应液中孵育，使DNA被特异性切割成不同大小的片段 ；

　　6. 电泳    将酶切后的小胶块置于琼脂糖凝胶中，施加交变方向的电场，使DNA片段按照大小分离 ；   

　　7. 染色、脱色  将电泳后的凝胶在含有DNA染料的溶液中染色，再在去离子水中脱色，使DNA片段可见 ；   

　　8. 读胶成像    将染色后的凝胶置于成像仪下，用紫外光照射，拍摄DNA指纹图谱；    

　　9. 条带分析    将DNA指纹图谱导入专用软件，进行条带匹配、聚类分析、遗传距离计算等，得出分型结果 。   

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