软骨细胞膜片的成软骨性能.doc

　　软骨细胞膜片的成软骨性能

　　周丽斌，吴 玮，丁瑞英，徐冰心，韩浩伦，王 刚，李保卫，王鸿南(解放军第306医院耳鼻咽喉头颈外科，北京市 100101)

　　引用本文：周丽斌，吴玮，丁瑞英，徐冰心，韩浩伦，王刚，李保卫，王鸿南. 软骨细胞膜片的成软骨性能[J].中国组织工程研究，2017，21():1843-1848.

　　DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2017.12.007 ORCID: 0000-0002-6339-3441(吴玮)

　　文章快速阅读：

　　文题释义：

　　细胞膜片：细胞膜片技术是通过物理的方法将扩增融合的细胞从培养皿底壁分离，获得膜片状细胞结构的一种技术。与传统胰酶消化收集细胞的方法相比，运用该技术收集到的细胞保留了体外培养过程中分泌的胞外基质、建立的细胞-基质连接以及细胞间连接等结构。

　　组织工程：从机体获取少量的活体组织细胞，在体外进行培养扩增，然后将扩增的细胞与具有良好生物相容性、可降解性和可吸收的生物材料(支架)按一定的比例混合，使细胞黏附在生物材料(支架)上形成细胞-材料复合物；将该复合物植入机体的组织或器官病损部位，随着生物材料在体内逐渐被降解和吸收，植入的细胞在体内不断增殖并分泌细胞外基质，最终形成相应的组织或器官，从而达到修复创伤和重建功能的目的。

　　摘要

　　背景：基于温敏培养皿的细胞膜片技术在组织工程研究中受到越来越多的关注，但是温敏培养皿价格高昂，有必要研究替代方法。

　　目的：应用普通培养皿进行细胞膜片培养，并分析软骨细胞膜片的成软骨性能。

　　方法：取1例鼻中隔偏曲患者手术切除的鼻中隔软骨消化提取原代软骨细胞，扩增培养。取第3代细胞在体外密集培养，使之分泌细胞外基质，形成单层细胞膜片；另取第2代软骨细胞，叠加接种于单层细胞膜片上，使其贴覆生长，形成双层细胞膜片。应用细胞刮刀收获细胞膜片，研究其性状，进一步在体外培养、植入裸鼠体内构建出人工软骨块。

　　结果与结论：①单层细胞膜片和双层细胞膜片均形成质软的凝胶样结构，大体观察两者无明显区别；②新刮起的细胞膜片具有良好的可流动性和成胶性；植入裸鼠体内培育8周之后，均形成成熟的软骨块；③组织学观察见细胞膜片是由成层排列的软骨细胞和细胞外基质组成的薄片，在体外培养过程中即有糖胺聚糖和Ⅱ型胶原的初步表达，植入体内8周之后形成的软骨呈现为成熟的软骨组织；④生化定量检测结果表明，DNA含量高于天然鼻中隔软骨，而糖胺聚糖和羟基脯氨酸含量与天然软骨差异无显著性意义；⑤结果提示，应用普通培养皿可成功构建并获取细胞膜片，细胞膜片呈现良好的成软骨性能。

　　关键词：

　　组织构建；软骨组织工程；细胞膜片；软骨；培养；普通培养皿；糖胺聚糖；Ⅱ型胶原；成软骨性能；国家自然科学基金

　　主题词：

　　软骨；培养技术；胶原Ⅱ型；组织工程

　　基金资助：

　　国家自然科学基金青年科学基金项目

　　Chondrogenesis of chondrocyte cell sheets

　　Zhou Li-bin, Wu Wei, Ding Rui-ying, Xu Bing-xin, Han Hao-lun, Wang Gang, Li Bao-wei, Wang Hong-nan (Department of Otorhinolaryngology Head and Neck Surgery, the 306th Hospital of PLA, Beijing 100101, China)

　　Abstract

　　BACKGROUND: The cell-sheet technology, based on a temperature-responsive culture, has been drawing more and more attention; however, the temperature-responsive culture dish is quite expensive. Therefore, it is imperative to develop a substitutive technique.

　　OBJECTIVE: To study the feasibility of cell-sheet culturing using common culture dish, and investigate the chondrogenesis of the cell sheet.

　　METHODS: A piece of nasal septal cartilage was adopted from a patient with deviation of nasal septum to extract primary chondrocytes