干货｜你打新冠疫苗了吗？来看看关于疫苗那些你不知道的事

　　

　　目前，国内新冠疫情防控工作已取得令世界瞩目的成果，鼓励全民免费接种新冠疫苗，无疑是加快防疫屏障建立的重要举措，那么，对于疫苗，你究竟了解多少呢？其实，疫苗想要成功上市，需要经过长时间的临床研究，鉴于目前新冠病毒肆虐全球，目前上市的疫苗都是加快进程附条件上市的，针对新冠病毒的疫苗，在临床研究中不能只是评测体液免疫，细胞免疫也是非常重要的评价指标。接下来，小V带你一起看看，关于疫苗那些你不知道的事。

　　新冠病毒入侵过程

　　

　　图1 病毒入侵与体内免疫过程[1]

　　如图1所示，冠状病毒利用其表面刺突蛋白与人类细胞表面的ACE2受体结合，一旦病毒进入细胞内部，这些细胞就会翻译病毒的RNA来制造更多的病毒。特异性的“抗原呈递细胞”吞噬病毒，并提呈病毒特异性抗原来激活辅助性T细胞。辅助性T细胞激活细胞毒性T细胞去识别并杀伤病毒感染的细胞，同时激活B细胞产生抗体来阻断病毒感染。这一过程中，机体也形成生存期长达数月或数年的记忆B细胞和记忆T细胞，提供持久性免疫保护。

　　目前国内上市疫苗

　　截止到5月，国内已经附条件上市5款疫苗，分别是国药中生北京公司、国药中生武汉公司、北京科兴中维公司的三种灭活疫苗，以及天津康希诺腺病毒载体疫苗和智飞生物新冠重组蛋白疫苗。同时，复星医药的新冠mRNA疫苗也进入最后的上市提交阶段。通过疫苗的临床评价，展示了不同技术方案疫苗的安全性、有效性等特点。

　　为什么要做细胞免疫评价

　　人体在感染新冠病毒大约10天左右产生抗体，但随时间流逝，抗体会逐渐减少。英国的科学家发现，在康复患者体内，六个月后仍可检测到特异性针对新冠病毒的细胞免疫。

　　人体的免疫系统是一个复杂又神奇的存在，既能帮助人体有效抵御病原体的侵害，又能维持平衡不攻击正常的人体细胞。人体免疫包括非特异性免疫和特异性免疫，其中特异性免疫简单来说又分为体液免疫（B 细胞主导，通过分泌抗体来起作用）和细胞免疫（T细胞主导，通过分泌细胞因子来起作用）。在免疫反应中，CD4+T细胞具有激活B细胞和CD8+T细胞的功能，B细胞主要产生中和抗体，而CD8+T细胞主要在细胞免疫中通过分泌细胞因子来起作用。

　　表1 常见辅助T细胞比较

　　

　　细胞免疫可以通过免疫学测定的方法检测细胞因子分泌来评测。细胞因子的检测方式有酶联免疫斑点检测（ELISPOT）和胞内细胞因子染色（ICS）。

　　酶联免疫斑点检测（Enzyme-linked Immunospot Assay，ELISPOT）是将细胞培养技术和ELISA技术相结合，可以原位地检测培养细胞体外分泌蛋白的高灵敏分析技术。该技术可从单细胞水平检测分泌抗体细胞或分泌细胞因子细胞的一项细胞免疫学检测技术。由于该法集高灵敏度、特异性强、高通量、单细胞水平、功能性检测以及低成本等诸多优点于一身，是研究Th1/Th2的反应，疫苗研制、病毒感染的检测和治疗、肿瘤学、传染性疾病、自身免疫性疾病和器官移植的理想工具。

　　胞内细胞因子染色（ICS）是用表面标记抗体区分细胞亚群，用抗细胞因子抗体与胞内细胞因子结合，即可检测不同细胞亚群细胞因子的分泌。可以快速简便的根据细胞因子确定细胞亚型，减少样本处理与生物源性污染，更准确反映体内状况。

　　目前新冠疫苗诱导细胞免疫情况

　　抗体检测一直都是疫苗评价的关键指标。对于新冠这一病毒性疾病疫苗，除了检测抗体，细胞免疫检测也非常重要。

　　Moderna的候选mRNA疫苗mRNA-1273在非人灵长类动物中诱导Th1应答[2]，

　　

　　图2 Moderna的候选mRNA疫苗诱导细胞免疫[2]

　　辉瑞公司的候选mRNA疫苗在人体中诱导了明显的CD4和CD8 T细胞应答[3]。

　　牛津大学的腺病毒载体ChAdOx1疫苗在非人灵长类动物中诱导CD4和CD8 T细胞应答，在人体试验中产生INF-γ的T细胞[4]。

　　科兴中维的灭活疫苗在小鼠和非人灵长类动物的临床前研究中未观察到T细胞应答[5]，在两种候选灭活疫苗的I期临床试验中也没有出现T细胞应答[6,7]。

　　

　　图3 灭活疫苗诱导细胞免疫[5]

　　Novavax重组蛋白疫苗联合Matrix M佐剂后，出现CD4 T细胞多功能应答，但没有检测CD8 T细胞反应[8]，在没有添加佐剂时，不能激起细胞免疫。

　　

　　图4 Novavax重组蛋白疫苗联合Matrix M佐剂诱导细胞免疫[8]

　　因此，关于新冠疫苗的研究显示mRNA和病毒载体疫苗能够诱导较强的T细胞反应，重组蛋白疫苗在佐剂的作用下也能诱导T细胞反应，但是疫苗诱导免疫与保护相关的程度尚不清楚，仍需要进一步研究。

　　诺唯赞提供新冠疫苗评价服务

　　提供新冠疫苗临床前试验的体液免疫评测服务

　　1、基于HIV和VSV的假病毒系统中和活性检测

　　2、基于ELISA的体液免疫评测

　　a.新冠疫苗临床前样本的中和抗体检测

　　b.新冠疫苗临床前样本的IgG总抗检测

　　新冠疫苗临床研究的体液免疫和细胞免疫评测服务

　　1、基于HIV和VSV的假病毒系统中和活性检测

　　2、基于ELISA的体液免疫评测

　　a.新冠疫苗临床样本的中和抗体检测

　　b.新冠疫苗临床样本的IgG总抗检测

　　c.新冠疫苗临床样本的lgG分型检测

　　d.新冠疫苗临床样本的IgA总抗检测

　　3、基于ELISpot的体液免疫评测

　　a.新冠疫苗临床样本的IgG记忆B细胞分析

　　4、基于ELISpot和ICS的细胞免疫检测

　　a.ELlSpot(IFN-v、TNF-a、IL-2、IL-4、lL-5、IL-13)

　　通过ELISpot分析疫苗免疫后的T细胞免疫效果

　　b.ICS(IFN-v、TNF-a、IL-2、IL-4、IL-5、IL-13)

　　利用3激光10色流式细胞仪,检测疫苗免疫后的T细胞免疫,分析Th1和Th2比例

　　疫苗上市后的免疫效果检测

　　中和抗体检测的经典方法是噬斑减少病毒中和试验(Plaque Reduction Neutralization Test, PRNT)。此方法涉及活病毒和细胞的培养,对生物安全级别要求高(需要在P3实验室完成),且操作复杂、检测通量低,使其大范围开展受到限制。

　　使用诺唯赞开发新冠假病毒检测产品和新冠中和抗体ELISA检测试剂盒(Anti-SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody ELISA Kit)，可以满足进行疫苗大规模接种后免疫效果监测和保护力评估的需求。

　　产品列表

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　　疫苗评价相关产品

　　

　　【参考文献】

　　[1] Ewen Callaway; THE RACE FOR CORONAVIRUS VACCINES.

　　[2] K.S. Corbett, et al., Evaluation of the mRNA-1273 vaccine against SARS-CoV-2 in nonhuman Primates, N. Engl. J. Med. 383 (2020) 1544–1555.

　　[3] U. Sahin, et al., COVID-19 vaccine BNT162b1 elicits human antibody and TH1 T cell responses, Nature 586 (7830) (2020) 594–599.

　　[4] P.M. Folegatti, et al., Safety and immunogenicity of the ChAdOx1 nCoV-19 vaccine against SARS-CoV-2: a preliminary report of a phase 1/2, single-blind, randomised controlled trial, Lancet 396 (10249) (2020) 467–478.

　　[5] Q. Gao, et al., Development of an inactivated vaccine candidate for SARS-CoV-2, Science 369 (6499) (2020) 77.

　　[6] S. Xia, et al., Effect of an inactivated vaccine against SARS-CoV-2 on safety and immunogenicity outcomes: interim analysis of 2 randomized clinical trials, JAMA 324 (10) (2020) 951–960.

　　[7] Y.-J. Zhang, et al., Immunogenicity and safety of a SARS-CoV-2 inactivated vaccine in healthy adults aged 18-59 years: report of the randomized, double- blind, and placebo-controlled phase 2 clinical trial, medRxiv (2020), 2020.07.31.20161216.

　　[8] C. Keech, et al., Phase 1–2 trial of a SARS-CoV-2 recombinant spike protein nanoparticle vaccine, N. Engl. J. Med. (2020).

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