浅析Elisa酶联免疫免疫吸附实验

　　酶联免疫吸附实验

　　英文名称：Enzyme Linked Immunosorbent Assay

　　缩写：Elisa

　　一、检测原理：在聚苯乙烯制成的96孔板子上包被抗体，然后利用该抗体识别待测样本中的抗原（被检测物质），将待测样本中的抗原通过抗原抗体的免疫反应吸附到96孔板子表面，再用辣根过氧化物酶标记抗体通过直接或者间接的方法输出识别信号，最后利用信号强度计算出待测样本中需要检测抗原的浓度。

　　

　　二、检测方法：直接法、间接法、双抗体夹心法、竞争法。

　　

　　三、检测步骤：以双抗体夹心法为例

　　抗体包被：

　　将用0.05M PH9.6的碳酸盐包被缓冲液稀释好的抗体加入96孔板子，每孔100微升，放置4℃过夜，再用洗液洗涤三次，洗掉未结合在板子上的抗体。

　　封闭：

　　加入封闭液（一般为BSA),37℃孵育1小时，再用洗液洗涤三次，洗掉未结合在板子上的材料。

　　加入待测样本：

　　将待测样本加入96孔板，37℃孵育1小时，再洗板三次，洗掉未结合在板子上的待测样本。

　　加入二抗标记的辣根过氧化物酶(HRP)：

　　加入带有辣根过氧化物酶标记的酶标二抗，与结合在一抗上面的抗原结合，37℃孵育1小时，再洗板三次，洗掉未结合的二抗标记的辣根过氧化物酶。

　　显色：

　　将显色液A与B混合后，每个96孔板的孔里加入100微升，并放置在阴暗处10分钟。

　　终止反应：

　　每孔加入2M的硫酸终止液50微升。

　　读数：

　　用专用的酶标仪读取结果。

　　四、注意事项：

　　提前准备好各步骤需要的液体。

　　因为样本基本上都是在冰箱储存，检测前需要及时挪至室温平衡至室温状态。

　　避免污染：各种污染会导致Elisa实验结果的准确性变差

　　实验室必须干净；

　　无较强气流；

　　加样品枪头及时更换；

　　加样时候必须稳当，放置样品喷溅至隔壁孔。

　　设立阳性对照孔与阴性对照孔。

　　使用的移液器及机器必须是校准合格并在有效期内的。

　　五、Elisa酶联免疫吸附实验的优点

　　操作简单、相对快速、灵敏度高、特异性强、实验设备相对简单、应用范围广泛、污染小、能定性及半定量，定量分析。是目前应用最广，发展最快的免疫学技术方法。

　　六、Elisa酶联免疫吸附实验的缺点

　　检测时间相对较长，与市面上已经开始大批量使用的胶体金检测，荧光检测等相比时间长处较多倍。

　　对操作人员的要求有一定的专业技能性，不适合大众操作。

　　需要借助于仪器设备。

　　七、小结：

　　Elisa酶联免疫吸附实验是目前商业应用最为成熟的免疫分析方法之一，在医学检验，临床诊断，生物制药方面的运用极为广泛，很多厂家都开发了针对各种蛋白质，生物标记物，病毒和细菌的酶联免疫吸附分析检测试剂盒。

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