细胞培养protocol大汇总，学会了不用再靠学长学姐了

　　生物医学科研是一门实验科学，光有理论是不行的，还要有实验来验证理论的正确性。

　　然而作为科研小白，每当要做实验时，总会抓狂。这不，我又因为Co-IP 实验失败去求助师姐……

　　师姐，我的Co-IP 实验总是失败，我都emo了......

　　千万不要灰心，其实Co-IP 实验有很多优点的。

　　比如：

　　1、CO-IP 检测的蛋白相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响。

　　2、由于检测的蛋白是天然状态下的，具有天然的翻译后修饰。

　　3、可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。

　　师姐，听你这么一说，我觉得我又可以了！你能给我说说做实验时都需要注意些啥吗？

　　好的呀，Co-IP 实验需要注意这两点：

　　1. 裂解液：

　　1) 细胞裂解采用温和的裂解条件，不能破坏细胞内存在的所有蛋白质－蛋白质 相互作用，多采用非离子变性剂（NP40 或 Triton X-100)。每种细胞的裂解条件是不一样的，通过经验确定。

　　2) 不能用高浓度的变性剂（0.2％SDS)，细胞裂解液中要加各种酶抑制剂，如商 品化的 cocktail

　　2. 抗体：

　　使用对照抗体：（阴性和阳性）

　　阴性：单克隆抗体：同一种属的 IgG

　　兔多克隆抗体：正常兔 IgG

　　阳性：细胞内某种蛋白的抗体（做膜蛋白 A，用膜蛋白 B）

　　好的，师姐你继续说，我记一下......

　　记啥呀，这些解螺旋都整理好了，直接领取现成的！

　　解螺旋整理出10+机制探索实验Protocol，包含CO-IP 实验、ChIP实验、免疫荧光实验、分子检测等热门实验！

　　原理直白，条理清晰，步骤详尽，丝丝入扣，疑难杂症一网打尽，更重要的是，小白也能学5分SCI实验！（划到底部立即领~）

　　目录

　　

　　

　　一、8个转录调控方向实验Protocol

　　随着分子生物学研究方法的不断发展，转录调控的研究也来越火热。

　　解螺旋为大家准备了8个转录调控方向实验Protocol，包括双荧光报告基因实验、Co-IP 实验、ChIP 实验、组蛋白修饰、DNA修饰、重亚硫酸盐测序法实验、EMSA实验。

　　每个实验都详细介绍了实验原理、实验操作流程、实验操作要点、实验分组设计、数据处理与绘图……小白也能轻松学习5分SCI实验。

　　1

　　双荧光报告基因实验

　　利用荧光素为底物来检测萤火虫荧光素酶活性，能用于检测转录因子与DNA片段的相互作用，或miRNA对目的基因表达的调节等。

　　

　　

　　2

　　ChIP实验

　　染色质免疫沉淀，是检测生理状态下DNA 结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术。

　　

　　

　　3

　　Co-IP实验

　　使用非变性细胞裂解液裂解细胞后，细胞内存在的 许多蛋白质－蛋白质间的相互作用未被破坏，当用特异性的抗体和agrose beads去免疫沉淀存在相互作 用的蛋白复合物中的某一个特定的蛋白质时，整个蛋白复合物就能被一起沉淀下来。

　　通过蛋白变性分离， 再对蛋白复合物中的蛋白组分进行检测，就能证明这些蛋白具有相互作用。

　　

　　

　　4

　　EMSA实验

　　研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术。

　　

　　

　　5

　　DNA修饰

　　DNA 的修饰有磷酸化修饰、甲基化修饰、乙酰化修饰和泛素化修饰。

　　

　　

　　6

　　重亚硫酸盐测序法实验

　　硫酸盐使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变，PCR扩增目的片段并测序分析。

　　

　　

　　7

　　组蛋白修饰

　　与 DNA 结合的蛋白有组蛋白和非组蛋白，DNA 和与其结合的组蛋白都能发生修饰，并且这些修饰可能与基因的转录活化相关。

　　

　　

　　二、4个信号转导方向实验Protocol

　　1

　　Western Blotting实验检测

　　蛋白免疫印迹（Western Blotting）是将电泳分离后的蛋白质从凝胶转移到NC膜或PVDF膜上，然后用特异 性抗体检测某特定蛋白的一种蛋白质检测技术。

　　

　　

　　2

　　免疫荧光实验

　　免疫荧光化学（Immunofluorescence ，IF）利用抗原与抗体特异性结合的原理，使用抗体去标记组织细胞内的蛋白质，然后通过荧光显微镜观察抗体上偶联的荧光基团使抗体显色来确定组织细胞内的蛋白质的位置和表达量。

　　

　　

　　3

　　泛素-蛋白酶体通路

　　泛素-蛋白酶体降解也是调控蛋白表达水平的重要机制，参与了几乎所有生命过程，包括细胞的分裂、生长、DNA 修复过程中的信号转导、细胞的运动及凋亡等。

　　

　　

　　4

　　信号通路相关知识

　　包括信号通路介绍、信号通路查询——以 Wnt 信号通路为例、信号通路数据库的使用、信号通路分子的检测、AI 绘制模式图等，掌握这些，搞定90%的分子机制研究！

　　

　　

　　三、读文献学做实验

　　做实验很重要，文献阅读也不可忽视，读文献是科研人一生的事情，是一种习惯和技能，而做实验是完成实验设计和验证自己学术思想的途径。

　　解螺旋为大家整理了多篇文献，通过阅读文献帮助我们完善和调整实验设计，通过实验过程进一步理解和领悟文献中的相关细节。

　　

　　

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