天能VE

栏目:热点资讯  时间:2022-12-22
手机版

  

  Western Blot 样品制备要加蛋白裂解液(含有蛋白酶抑制剂),然后冰上研磨,收集于EP管,冰上裂解30min,4度12000rpm离心15min,取上清分装,即得到蛋白样品。建议直接电泳,多余的-80保存。建议分装的蛋白每支略多于一次上样量,一次性用完一支,避免反复冻融。

  

  ELISA样品,直接脑组织冰上匀浆,收集于EP管,同上一样离心,大约220-250ul每支分装(因为ELISA上样量基本都是每孔100ul,做复孔,每个样品2孔,就需要200ul,为了避免不够2孔,分装时要大于200ul每支),直接实验。多余的-80保存,一样避免反复冻融。不过ELISA最好少量样品进行预实验,或者查阅文献,看看大概组织里有多高浓度,选择合适的试剂盒,测量范围要与组织浓度相符。避免浓度过高测量不准,或者浓度过低,小于试剂盒最低可测浓度。

  

  一、目的虽然两者都是通过抗原抗体反应对蛋白质进行检测,WB主要还是定性,Elisa可以定性,也可以定量。WB所检测的一般是抗原,而Elisa抗原抗体都可以检测。WB所检测的抗原可以知道其分子量的大小,或是否是多聚体、降解产物等,一句话,WB可以确定所用抗体是与那种蛋白起作用的;而Elisa无能为力,一锅端了。二、模式WB是(抗原-抗体-二抗酶)模式进行检测;Elisa模式有多种,如(抗原-抗体-二抗酶)、(抗原-抗体-抗原酶)、(抗抗体-抗体-抗原酶)、(抗体-抗原-抗体酶)、(抗抗体-抗体-抗原-抗体酶)等等很多很多。

  

  三、抗体的适用性WB所适用的一抗一般是线性位点的,ELISA线性或构象型抗体都可以使用。从另一个意义上讲,WB可以做抗体是线性位点还是构象型位点的补充判定,而Elisa不行。四、灵敏度一般Elisa的灵敏度要远高于WB,这从一般酶标记物的使用浓度或待检样品的稀释度上就可以看出。五、可操作性WB一次处理量就是一块胶版,10-20个样品最多了。Elisa一块96孔板一次可以处理96个样本,可以设置多个复孔、对照、梯度样等来提高检测的可信度。WB操作常见的非特异性条带,膜本底差,显色不好等等缺点在Elisa上表现得要好得多。六、商品化度WB不管怎样,都要自己先做电泳。而Elisa有很多成熟的商品化试剂盒了,只要不怕花钱,检测要方便快捷得多。

  样本处理和染色方法

  

  1 悬浮细胞的染色:将正常培养和诱导凋亡的悬浮细胞(0.5~1×106)用PBS洗2次,加入100ul Binding Buffer和FITC标记的Annexin-V(20ug/ml)10ul,室温避光30min,再加入PI(50ug/ml)5ul,避光反应5min后,加入400ul Binding Buffer,立即用FACScan进行流式细胞术定量检测(一般不超过1h), 同时以不加AnnexinV-FITC及PI的一管作为阴性对照。2 贴壁培养的细胞染色:先用0.25%的胰酶消化,洗涤、染色和分析同悬浮细胞。3 爬片细胞染色:同上,最后用荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜进行观察。

  VE-586 转移电泳槽是用来对少量核酸及蛋白质样品进行转移电泳的装置

  操作简便,方便环保

  创新设计,同时可 以转印四块凝胶

  做到一槽多用,可节省实验空间和经费

  

  性能特点

  槽体采用高强度和高透明度的聚碳酸酯材料注塑成型,免除液体渗漏的困扰。

  专用开启式转移胶架,操作方便。

  可同时转印四块9×9cm凝胶

  举报/反馈

上一篇:重磅!全国首个可同时进行艾滋病毒(HIV)定量/定性核酸检测试剂盒获批!
下一篇:3岁以下感染病情会不会更重?发热惊厥怎么办?儿科医生建议