小鼠热烧伤模型的皮肤炎症反应 4 身材总监烧烫伤弹力衣定制

　　肥大细胞驻留在皮肤中，并在受伤后完全脱颗粒，这导致颗粒特异性染料染色减少。与此一致，在加热棒模型中，烧伤后观察到颗粒状肥大细胞减少。肥大细胞通过释放组胺和TNF以及合成IL-1β、IL-6、角质形成细胞生长因子和VEGF促进炎症、再上皮化和血管生成。在愈合迅速、炎症和疤痕较少的组织中，如妊娠早期小鼠的皮肤，以及猪的口腔粘膜，据报道肥大细胞数量、大小和脱颗粒减少。肥大细胞也影响成纤维细胞，调节胶原重塑，而不是产生，在人类和动物模型中，肥大瘢痕中观察到的数量高于正常皮肤或正常瘢痕。因此，在这个烧伤模型中，瘢痕组织中肥大细胞的数量较高，这与增生性瘢痕的数量一致。

　　人类增生性瘢痕在3-6个月内体积增大，然后在至少一年内开始成熟、变平和软化。发育中的疤痕显示真皮和表皮增厚，明显的炎性浸润和大量平行的III型胶原纤维。成熟的增生性瘢痕显示更明显的真皮增厚，没有真皮附属物、胶原轮和扁平的表皮。在加热棒模型中，残留疤痕的面积、真皮厚度、平行胶原纤维的数量和大小逐渐增加。早期瘢痕中也可见增厚的表皮和炎性浸润，III型胶原高表达，表明在3-4周内，该模型与正在发展的人类增生性瘢痕一致。在此之后，疤痕开始成熟，表皮厚度减少，炎症浸润，I型胶原表达增加。然而，到10周时，疤痕显示胶原重塑为篮状编织纤维和皮肤附属物再生的迹象，表明疤痕正在减少。这种发育和分解模式与其他需要机械或化学干预以产生增生性瘢痕的小鼠模型一致。

　　加热棒小鼠模型已经，并且可能会继续被用于研究旨在治疗与人类烧伤相关的受损愈合、感染和增生性瘢痕的干预措施。这项研究的结果表明，该模型模拟了人类烧伤后的早期炎症事件，因此适合于研究抗炎和免疫调节疗法，获得的结果可能具有临床可译性。证据还表明，该模型模拟了正在发育的增生性瘢痕，但由于瘢痕自然消退，其在这方面的应用受到限制。然而，该模型可用于评估旨在预防增生性瘢痕而非解决增生性瘢痕的治疗方法。该模型和研究设计的另一个局限性是烧伤伤口是开放的，因此更容易受到感染和小鼠的干扰。浅表烧伤的临床治疗包括覆盖敷料，尽管关于敷料对局部厚度烧伤或深度烧伤的益处存在争议。敷料有助于烧伤内保持水分，防止焦痂形成，促进再上皮化，以及促进局部治疗的使用。因此，如果用敷料覆盖加热棒烧伤，该模型中的愈合和瘢痕形成动力学以及炎症反应的大小和时间可能不同。

　　4.材料和方法

　　4.1. 小鼠热烧伤模型

　　所有的程序都是由奥塔哥大学动物伦理委员会批准的（第86／013），动物来源于Hytas-TayeRi资源单位（达尼丁，新西兰）。C57BL/6小鼠（雌性，8周龄）通过皮下（SC）注射氯胺酮/多米托/阿托品（分别为75/1/0.05 mg/kg）麻醉，背部剃毛、脱毛并用生理盐水清洗。如前所述，通过在背部放置直径为8 mm的铝棒4 s，在沸水中加热5 min，进行热损伤。给小鼠皮下注射生理盐水以防止脱水，给小鼠注射布比卡因（2 mg/kg）以减轻疼痛，给小鼠注射安非他明（30 mg/kg）以防止感染。未对烧伤创面进行敷料或局部治疗。然后通过SC注射抗血清（新西兰奥克兰Zoetis）（5 mg/kg）使小鼠苏醒。当小鼠被吸入异氟醚（1-5%）固定时，用一把直尺对准烧伤处拍摄数码照片。在第1天、第3天、第7天、第10天、第14天、第21天、第28天、第42天和第70天对小鼠实施安乐死，通过外科手术切除烧伤并沿中外轴平分。其中一半固定在0.5%锌盐溶液中，并加工成石蜡，以便对烧伤的中点进行切片，并在各组之间进行比较。另一半的RNA在RNAPlater溶液（德国希尔登Qiagen）稳定，储存在?80摄氏度。

　　4.2. 组织学

　　在强光下观察用MSB或甲苯胺蓝染色的皮肤切片（4μm）。皮肤切片（4μm）用苦味酸红染色，用偏光滤镜在暗场下观察。以10倍放大率拍摄该剖面的图像，然后使用Photoshop（Adobe Systems）将其转换为全景图。使用ImageJ(http://imagej.nih.gov/ij/)，测量烧伤宽度和新表皮覆盖比例。再上皮化按新表皮覆盖烧伤宽度的百分比计算。在烧伤范围内进行了四次表皮和真皮厚度测量，在烧伤两侧距离500μm处进行了两次进一步测量。用瘢痕面积除以平均真皮厚度，计算出真皮瘢痕指数。用内表皮厚度测量值的平均值除以远端表皮厚度测量值的平均值，计算表皮瘢痕指数。在甲苯胺蓝染色切片的图像中对肥大细胞进行定量。图像转换为8位，勾勒和测量整个烧伤/疤痕组织区域，调整阈值以突出显示使用粒子分析工具计数的染色细胞。在picrosirius红染色切片图像中检查瘢痕组织内的胶原密度。将图像转换为8位，勾勒出疤痕组织，自动调整阈值以突出显示染色的胶原，测量值占疤痕总面积的百分比。

　　4.3. 免疫荧光组织化学

　　皮肤切片（4μm）与Gr-1抗体（AlexaFluor?488-RB6-8C；美国加利福尼亚州圣迭戈市eBioscience；稀释度1:100），F4/80（AlexaFluor?594-BM8；电子商务；1:100），钙卫蛋白（MAC387，英国剑桥Abcam，1:200）与山羊抗鼠IgG H+L（AlexaFluor?488；美国加利福尼亚州卡尔斯巴德市因维特罗根；1:500），iNOS（兔多克隆ab3523；阿布坎；1:100）与山羊抗兔免疫球蛋白G（H+L）（AlexaFluor?594；体外激素；MHC II级IA+IE（FITC-M5/114.15.2；阿布坎；1:400); 以及来自表达CD207抗体的细胞的上清液（929F3；1:5）与山羊抗鼠IgG2a（AlexaFluor?594；体外激素；1:500). 根据制造商的说明使用了死端荧光测量TUNEL系统（美国威斯康星州麦迪逊Promega）。细胞核用DAPI（Invitrogen，75nm）染色，载玻片用SlowFade金（Invitrogen）固定。以40倍放大率拍摄染色切片的图像，然后转换成全景图。为了量化特定的细胞类型，在抗体染色的烧伤/瘢痕组织切片的图像中随机选择0.25 mm×0.25 mm的正方形，在真皮/表皮连接处（每个切片4个）和皮下（每个切片4个）。人工计算每个正方形中染色细胞的数量，并以相对面积表示。从表皮表面到凋亡/坏死组织底部进行四次烧伤深度测量，通过TUNEL染色突出显示。在烧伤两侧500μm的距离处，从表皮表面到肉质盘和皮下组织/皮下组织交界处，进行了另外两次测量。

　　4.4. 定量聚合酶链反应

　　将每只动物的两个烧伤样本合并并均质，然后分离总RNA。使用总RNA、寡核苷酸（dT）15和使用上标III（Invitrogen）的随机六聚体引物合成cDNA。使用Applied Biosystems 7500 Fast PCR机、PerfeCTa?SYBR?Green FastMix?（美国马萨诸塞州贝弗利Quanta BioSciences）和相当于5ng RNA的cDNA进行定量PCR。引物对如前所述。基因表达标准化为TBP[64]和取自年龄和性别匹配小鼠的未受损皮肤。

　　5.结论

　　这项研究表明，热金属烧伤在小鼠体内产生高度可重复的局部厚度损伤，模拟了烧伤后在人类身上观察到的炎症和增生性瘢痕反应的关键方面。该模型中产生的部分厚度烧伤创面通过收缩和再上皮化在两周内闭合，如人类烧伤所见。同样，与人类烧伤一致，损伤导致促炎症介质表达增加，中性粒细胞内流，LC和肥大细胞消失。随后是DC和巨噬细胞的流入，这两个群体在烧伤结束时达到高峰。与人类烧伤一样，在10周内，残余疤痕的大小、表皮和真皮厚度以及肥大细胞数量均增加，但与人类烧伤不同的是，烧伤愈合后3-4周，异常的I型胶原-III型胶原比率、纤维组织和巨噬细胞数量均消失。因此，该模型在进一步了解烧伤愈合并发症、感染易感性和增生性瘢痕形成的复杂过程方面具有相当大的潜力。为了增加关于炎症和皮肤驻留免疫细胞及其在再上皮化和烧伤收缩中的作用的知识，应在烧伤愈合前两周内使用该模型。此外，在闭合后3-4周，该模型可用于研究参与瘢痕形成和重塑的免疫细胞群。该模型的使用可能受到限制，因为它似乎无法模拟与人类烧伤相关的全身炎症、免疫抑制和持久性瘢痕。然而，通过描述与小鼠模型愈合和瘢痕形成相关的炎症反应，本研究提供了关键信息，将指导新的和急需的热烧伤抗炎和抗瘢痕治疗的临床前评估。

　　本信息并非旨在或暗示作为专业医疗建议的替代；不应在任何医疗紧急情况下使用，也不应用于任何医疗状况的诊断或治疗。所有医疗紧急情况请拨打120。 烧伤压力治疗是治疗和预防烧伤后异常疤痕最常用的疗法，特别是在北美、欧洲和澳洲，烧伤压力治疗被认为是常规疗法，被认为是首选的保守疗法，烧伤压力治疗可以使皮肤变薄，柔韧性更好。由于烧伤压力治疗无创性的特点和预期良好的治疗效果，且并发症少，目前在欧美许多烧伤中心是治疗增生性烧伤疤痕的标准一线疗法。 身材总监医学烧伤压力衣弹力衣定制衣源自德国，来自台湾，植根大陆，98年进入大陆市场，与林口长庚，成大医学院，桃园长庚，国军高雄，阳光烧伤重建基金会，等专业相关机构合作，对130多例烧烫伤患者2年以上的定制压力衣使用及后续跟踪，结合多年市场实践经验积累，制作国内科学体系烧烫伤恢复医学压力衣系列{烫伤压力衣}{烫伤弹力衣}{抗疤压力衣}{抗疤弹力衣}{疤痕压力衣}{疤痕弹力衣}{瘢痕弹力衣}{瘢痕压力衣}{烧伤手套}{烫伤防疤痕手套}{烧伤弹力衣}{烧伤弹力面罩}{烧伤弹力头套}{烧伤压力裤}{烫伤弹力裤}{医用压力衣}{儿童烧烫伤压力衣弹力衣}{硅酮霜}，并配有有专业物理治疗师，职能治疗师进行相关指导恢复。身材总监医学压力衣弹力衣定制

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